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细胞形态异常,鱼骨图来帮忙(五)

来源: 上海逍鹏生物科技有限公司   2019-10-31   访问量:661评论(0)

细胞培养过程中

细胞辅助试剂是不可或缺的角色

那么它是怎么影响细胞形态的呢?

BI中国市场部带您分析分析~

细胞辅助试剂可分为以下四部分:

接下来我们逐条分析!
(点击图片,可查看详细鱼骨图链接)

 

 胰酶

 

★☆★☆★☆

什么情况下是胰酶可能出现了问题呢?
一旦发生消化时间逐渐拉长,或是细胞消化不下来,需注意胰酶是否已经失活。由于胰酶为蛋白类产品,反复冻融容易影响其活性。
品质不佳的胰酶也容易带入支原体或动物源性污染源,BI所生产的胰酶经过辐射照射处理,确保品质及有效杜绝支原体的引入。
临床培养可选用重组胰酶,以避免引入未知动物源病原体。

解决方案:

一般胰酶保存方式,建议15或50ml分装后-20℃冻存,使用前必须37℃水浴或培养箱回温,胰酶消化后使用不含钙镁的缓冲液清洗细胞,以稀释残余的胰酶。

若使用无血清培养基培养时(血清中含有胰酶抑制蛋白),使用胰酶消化后可使用胰酶抑制剂终止残存胰酶反应。

Biological Industries(BI)可提供:
(点击产品货号,可查看产品链接)

 

产品名称

   货号

Trypsin Solution B(0.25%), without Calcium and Magnesium, without Phenol Red

胰蛋白酶(不含钙和镁,不含酚红,不含EDTA)

Trypsin Solution B(0。25%),10X Conc, without Calcium and Magnesium, without Phenol Red

胰蛋白酶(不含钙和镁,不含酚红,10X浓缩液)

Crystalline Trypsin Solution(0.02%), without Phenol Red

水晶胰酶(不含钙和镁,不含酚红,不含EDTA)

Trypsin EDTA Solution A(0.25%),EDTA(0.02%), with Phenol Red

胰酶(胰蛋白酶0。25%,EDTA 0。02%)

Trypsin EDTA(0.5%), EDTA(0.2%),10X Conc, without Phenol Red

胰酶(不含酚红,10X浓缩液)

Trypsin EDTA Solution B(0.25%),EDTA(0.05%), with Phenol Red

胰酶(胰蛋白酶0。25%,EDTA0。05%)

Trypsin EDTA Solution C(0.05%),EDTA(0.02%), with Phenol Red

胰酶(胰蛋白酶0.05%,EDTA 0.02%)

Trypsin EDTA Solution C(0.05%),EDTA(0.02%), without Phenol Red

胰酶(胰蛋白酶0.05%,EDTA 0.02%,无酚红)

Soybean Trypsin Inhibitor 50X Conc., 5mg/ml

大豆胰蛋白酶抑制剂

03-048-1C

 
缓冲液

★☆★☆★☆

细胞在胰酶消化传代之前,应使用PBS洗涤残留的完全培养基(完全培养基中的血清含有胰酶抑制蛋白),如果是对于一些更难消化的细胞,则必须使用不含Ca2+,Mg2+离子的PBS,因为这些离子也会抑制酶的活性。

解决方案:

Biological Industries(BI)可提供:
(点击产品货号,可查看产品链接)


产品名称

货号

Hanks' Balanced Salt Solution,With  Calcium and Magnesium With Phenol Red

HBSS平衡盐溶液(含钙,镁和酚红)

Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS),  without Calcium and Magnesium

DPBS缓冲液

Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS),  10X Conc。, without Calcium and Magnesium

DPBS缓冲液(10X浓缩液)

Phosphate Buffered Saline (PBS),  PH=7.4, without Calcium and Magnesium

PBS缓冲液

Phosphate Buffered Saline (PBS),  PH=7。4, without Calcium and Magnesium,10X Conc。

PBS缓冲液(10X浓缩液)

应从正规供应商处购买,以确保品质,如渗透压、无菌等。


冻存液

★☆★☆★☆

冻存液中的抗冻剂对细胞多少具有毒性,所以细胞解冻复苏时,不宜在冷冻管内悬浮太久,需在解冻复苏后尽快转移到完全培养基中,并在隔天置换掉含有抗冻剂的培养基。

细胞的状态不佳,可提高培养基内血清的比率,隔天就更换培养基,以置换掉含有DMSO的培养基。也有可能有些细胞本身冷冻后存活率不佳或冷冻时的细胞数较少。

如以上都有注意到,但复苏率仍然不佳,就必须考虑是否为冻存操作步骤出了问题,是否程序降温、或冻存前细胞状态已不佳(存活率低)。

解决方案:
建议选取指数增长时期的细胞冻存,此时细胞状态较佳。
Biological Industries(BI)可提供:
(点击产品货号,可查看产品链接)

中文名称

货号

无血清细胞冻存液

无血清间充质干细胞冻存液

无血清干细胞冻存液

D10无血清冻存液


抗生素

★☆★☆★☆

细胞在体内是无菌生长状态,所以抗生素对细胞会有一定程度的影响。
已知某些抗生素对细胞的不同影响,如:
1。 β-内酰胺类抗生素(青霉素)--会影响蛋白质合成,抑制细胞生长增殖;
2. 氨基糖苷类/氨基糖类(链霉素,卡那霉素,庆大霉素)--会减少蛋白质合成,ATP水平降低,产生细胞毒性;
3。 内酯类(两性霉素B/fungizone, 制霉菌素)--干扰细胞膜,产生细胞毒性;
所以一般常规细胞培养,请尽量降低抗生素使用率,避免上述影响及细菌抗药性产生。

解决方案:

Biological Industries(BI)可提供:
(点击产品货号,可查看产品链接)

中文名称

货号

两性霉素B 250mg/ml

两性霉素B 2500mg/ml

制真霉素

青链双抗

青链双抗,10X浓缩

青链霉素+制真霉素 三抗

青链霉素+两性霉素B 三抗

青链霉素+新霉素 三抗

硫酸庆大霉素溶液

卡那霉素溶液

使用抗生素的时机:
1。 原代细胞培养时---因为在从组织分离时易带入污染;
2. 观察到,并且确认是微生物污染时(去除微生物后,应立即停用抗生素);
3。 尽量避免使用抗生素作为预防的方法;

好啦,本期介绍就到此处啦

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希望能帮助到各位噢

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--BI中国市场部


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