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高效提纯新冠病毒,贝克曼离心机是如何做到的?

来源: 贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司   2020-5-26   访问量:872评论(0)

 

贝克曼离心机—您实验室中的病毒分离专家

 

高效分离纯化病毒样品是病毒学研究以及抗病毒药物筛选、疫苗研制的基础。自19世纪60年代以来,贝克曼超速离心机一直致力于病毒分离研究,已成功帮助科学家分离得到几乎所有病毒种类。作为当之无愧的病毒分离专家,贝克曼Optima X系列超速离心机以其安全可靠、操作方便的卓越性能赢得了科学家的青睐,成为病毒分离的最佳之选。

新冠肺炎疫情以来,新病例迅速增加,在世界范围内引起大规模爆发,并导致了相当高的发病率和死亡率。科学家已鉴定其病原体为SARS-CoV-2,2020年3月11日,WHO将COVID-19列为大流行病。在病毒研究与药物筛选、疫苗研发中新冠病毒的分离纯化是必不可少的重要步骤,利用超速离心技术高效分离病毒的方法已被国内外专家广泛认可,成为病毒分离的主要方法。


超速离心机分离病毒

中国医学科学院与北京协和医学院的研究团队通过质粒转染构建了SARS-CoV-2 S蛋白假病毒系统,证明人类ACE2(血管紧张素转化酶2)是SARE-CoV-2病毒的功能受体,同时他们对SARS-CoV-2的易感细胞系、病毒受体、侵入途径等进行了研究,揭示了病毒侵入人体细胞的具体过程,这一研究已发表在《Nature Communication》杂志。

 

在研究中,为了检测假病毒系统SARS-CoV-2 S蛋白的表达,他们首先需要将假病毒颗粒从细胞裂解后的上清液中分离出来。在分离过程中,他们使用Beckman超速离心机,将病毒上清加入SW41水平转子的离心管中,并在离心管底部加入20%的蔗糖垫液,然后在4℃环境下以25,000rpm的转速离心2h。离心完毕后弃去上清,留下管底沉淀,并用30 μl缓冲液重悬,得到SARS-CoV-2假病毒样品用于后续检测。

 

在超速离心分离病毒时,为了保持病毒颗粒的完整性与病毒形态,经常使用垫液沉淀,例如在管底加入20%的蔗糖垫液,使颗粒到达管底时减速沉降,最大程度保持病毒颗粒活性与完整度。

 

超速离心机助力新冠病毒提取

武汉病毒研究所的石正丽研究员在2013年发表于国际顶尖杂志《Nature》的一篇研究中提到,他们从蝙蝠粪便样品中分离到一株活体的SL-CoV冠状病毒。在进行毒株提取与分离时,石正丽研究团队收集细胞培养上清液后,使用Beckman超速离心机Type 90 Ti定角转头加入20%的蔗糖垫液80,000×g离心90分钟,对收集到的病毒颗粒进行分离与浓缩。PBS重悬后染色,进行透射电镜的观察。

 

分离SARS-Cov-2假病毒样品

新华医院与杭州BaylorOracle公司合作对于SARS-Cov-2的抗病毒药物筛选研究中,他们通过体外构建SARS-Cov-2假病毒,研究发现吲哚美辛(indomethacin)是一种有效的SARS-Cov-2抑制剂。在分离SARS-Cov-2假病毒样品时,他们同样使用20%蔗糖垫液,50,000×g超速离心90分钟后,用PBS重悬得到病毒样品,并用于细胞感染。

 

更高纯度病毒样本提取

在病毒研究中,当使用电镜等方法观察病毒形态时,对病毒颗粒的纯度要求较高,仅使用差速离心法,如前文介绍的蔗糖垫超速离心,并不得到高纯度的病毒样品。因此通常使用密度梯度离心与蔗糖垫超速离心结合的实验方法来获得满足要求的高纯度、高浓度的病毒颗粒。

加拿大公共卫生局的研究人员在使用冷冻电子显微镜研究SARS-CoV冠状病毒与ACE2结合时的构象变化时,详细描述了他们如何使用Beckman的超速离心机进行病毒分离纯化的。收集上清后,他们首先使用Beckman SW32水平转头28,000rpm离心90分钟,PBS重悬后得到SARS-CoV病毒样品粗提产物。然后将病毒样品置于12-30%的碘克沙醇梯度液中使用SW40转头38,000 rpm离心2.5小时,然后收集高纯度的病毒样品用于电镜检测。

 

总而言之,贝克曼作为离心技术领域的专家,使用贝克曼超速离心机分离纯化病毒已得到科学家的广泛认可,具有庞大的用户群体与文献支持,是您进行病毒研究的可靠选择。

 


 

为了帮助研究人员高效分离病毒毒株与假病毒,病毒分离专家贝克曼库尔特推出病毒纯化专用的超离配置方案,致力于帮助客户解决病毒分离难题。

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自1947年第一台商用超速离心机发明以来,贝克曼库尔特离心技术已有70多年的历史。早在19世纪60年代,已有许多用户使用贝克曼离心机成功分离了多种病毒颗粒。截至现在,贝克曼超离已帮助客户分离纯化得到流感病毒、肝炎病毒、腺病毒、慢病毒等多种几乎覆盖所有类型的病毒样品。贝克曼庞大的用户群体已为研究人员储存发表了数以万计的病毒分离方法与文献,助力病毒研究的同时,也使贝克曼离心机成为了当之无愧的病毒分离专家。

 

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